Frage  |
Antworten |
|
Lernen beginnen
|
|
RT-qPCR, Real Time PCR, Multiplex PCR, RFLP PCR, Nested PCR
|
|
|
METODY SEKWENCJONOWANIA KWASÓW NUKLEINOWYCH Lernen beginnen
|
|
MAXAMA GILBERTA, SANGERA, SEKWENCJONOWANIE CYKLICZNE, PÓŁAUTOMATYCZNE,
|
|
|
SEKWENCJONOWANIE NOWEJ GENERACJI Lernen beginnen
|
|
Pirosekwencjonowanie, Metoda SOLEXA, metoda SOLID, metoda VisiGwn, metoda nanoporowa
|
|
|
Metody do wykrycia mutacji nieznanych Lernen beginnen
|
|
PCR-RFLP, ASO, SSCP, DGGE, HDA, CMC, DHPLC, HRMA
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
używana jest odwrotna transkryptaza, która syntentetyzuje cDNA na matrycyny mRNA (wcześniej trawionego DNAzami, aby uzyskać czystą matrycę), gdyż cDNA jest stabilniejsze od mRNA; samo PCR przebiega klasycznie
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
używane są radioaktywne nukleotydy, fluorochromy rezonansowe lub sondy Taq oznakowane bromkiem etydyny (5’ barwnik, na 3’ cząstka wygaszająca barwnik) - mogą łączyć się ze specyficzną bądź niespecyficzną sekwencją
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
powstanie wielu matryc podczas jednej reakcji; wykorzystuje się różny zestaw starterów (może to doprowadzać do błędów), które powinny mieć odpowiednią długość, zawierać 35-60% cytozyny i guaniny, a także topnieć w temperaturze 55-60 °C
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
powstały produkt trawiony jest enzymami restrykcyjnymi, a szczególnie konkretną sekwencję DNA; rozpoznawane są również sekwencje palindromowe powstają dwa krótsze łańcuchy DNA, które rozdziela się w żelu agarozowym
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
występuje w dwóch etapach: po pierwszym mogą powstać niespecyficzne produkty DNA (matryca do drugiego etapu), które w drugim są niwelowane; etap przy pomocy specjalnych starterów tzw. Primerów zewnętrznych zlokalizowanych w DNA
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
jedno- lub dwuniciowe fragmenty DNA znakuje się na 5’ końcu fosforem-32, biotyną, streptawidyną lub fluorescencyjnymi starterami; następnie używa się odczynników chemicznych modyfikujących zasady azotowe, tak aby degradować DNA w określonym miejscu:
|
|
|
PIPERYDYNA OPIS DZIALANIA Lernen beginnen
|
|
tnie wiązanie N-glikozydowe i fosfodiestrowe na końcu 3’ w miejscu przed zmodyfikowaną zasadą. Otrzymujemy cząsteczki o wyznakowanym, identycznym końcu 5’, zaś koniec 3’ posiada różną długość.
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
|
|
|
sekwencjonowanie cykliczne Lernen beginnen
|
|
wykorzystywany jest jedno- lub dwuniciowy DNA, produkt PCR, który musi być uprzednio oczyszczony; przebieg podobny do PCR, jednak używa się jednego startera i przeprowadza cztery reakcje – dla każdego ddNTP osobno;
|
|
|
sekwencjonowanie półautomatyczne Lernen beginnen
|
|
w tej metodzie zamiast znaczników radioaktywnych używa się znaczników fluorescencyjnych, co jest o wiele bezpieczniejsze, umożliwia przeprowadzanie jednej reakcji z wszystkimi ddNTP; wyniki przechowuje się na komputerze.
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
polega na syntezie komplementarnej nici podczas czego mierzy się poziom uwalnianego pirofosforanu, który reagując z sulfarazą i lucyferazą uwalnia strumień fotonów; syntetyzowanie różnych zasad również powoduje emisję światła o różnej intensywnosci
|
|
|
