Frage  |
Antworten |
Parametry analizatorów mas Lernen beginnen
|
|
Zakres mas, szybkość analizy, tryb przepuszczania jonów (przemiatające i jednoczesne), tryb pracy (ciągły i impulsowy)
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
różnica pomiędzy obserwowaną a przewidywana masą maleje wraz ze wzrostem m/z jonu
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
zdolność do rozróżnienia sygnałów o bliskich wartościach m/z
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
analizator kwadrupolowy, liniowa pułapka jonowa, kwadrupolowa pułapka jonowa, orbitrap, analizator czasu przelotu
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
SCAN - tryb przemiatania pełnego widma, Sim -tryb monitorowania wybranych jonów
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
Zbudowana z 2 elektrod sferycznych oraz elektrody kołowej. Kierujemy tutaj polem występującym wewnątrz. Tworzymy takie pole w kształcie siodła i zmieniamy jej położenie co powoduje że tylko niektóre jony zostaną przepuszczone. Im jony mają wieksze m/z tym mniej się poruszają się w pułapce jonowej. Jony można gromadzić i przechowywać w pułapce jonowej.
|
|
|
Separacja jonów w pułapce jonowej polega na... Lernen beginnen
|
|
Selektywna destabilizacja jonów oraz Wyrzut rezonansowy Selektywna destabilizacja jonów - przy zmianie V, powoli coraz bardziej destabilizuje nam się jon, Wyrzut rezonansowy selektywnie izoluje jon poprzez wyrzucenie innych m/z za pomoca wzbudzenia rezonsowego
|
|
|
Etapy eksperymentu w pułapce jonowej Lernen beginnen
|
|
0) Wstępny skan 1) Wprowadzenie jonów 2) Izolacja jonu/jonów 3) Chłodzenie wzbudzanie, reakcje jonu/jonów 4) Analiza masy jonu/jonów
|
|
|
"Analizator czasu przelotu Lernen beginnen
|
|
Czas przelotu jest proporcjonalny do masy, - Reflektron (zwierciadło jonowe) koryguje energię kinetyczną jonów, czyli skupia w czasie jony o rożnych energiach kinetycznych podnosząc rozdzielczość pomiaru m/z , Dłuższa droga przelotu jonów pozwala też na lepsze rozdzielenie zbliżonych wartości m/z"
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
(nie działa nigdy samodzielnie) jony o tym samym m/z oscylują synchronicznie wzdłuż osi z - pozostają zgodne w fazie przez setki tysięcy oscylacji
|
|
|
Etapy analizy jonów przez Orbitrap Lernen beginnen
|
|
1) Przygotowanie paczki jonów 2) Wprowadzenie jonów do orbitrapu 3) Osiowy ruch jonów oraz ich detekcja
|
|
|
Analizator ruchliwości jonów Lernen beginnen
|
|
może pracować pod ciśnieniem atmosferycznym, Pomiar ruchliwości zjonizowanych cząsteczce w gazie buforowym pod wpływem pola elektrycznego Naładowane cząsteczki dzięki obecności pola elektrycznego, przemieszczają się w przestrzeni wypełnionej neutralnym gazem i są rozdzielane na skutek zderzeń z jego cząsteczkami
|
|
|
Ruchliwość jonu zależy od: Lernen beginnen
|
|
ładunku, masy rozmiaru, kształtu (konformacji), masy i gęstości gazu w analizatorze, temperatury i ciśnienia w analizatorze
|
|
|
Tandemowe i hybrydowe spektrometrie mas mogą działać na zasadzie Lernen beginnen
|
|
fragmentacji rozdzielonej w przestrzeni oraz fragmentacji rozdzielonej w czasie
|
|
|
Aktywacja i dysocjacja jonów Lernen beginnen
|
|
fragmentacja indukowana kolizyjnie, fragmentacja indukowana na powierzchni, dysocjacja spowodowana absorpcją promieniowania elektromagnetycznego, dysocjacja spowodowana wychwytem elektronu
|
|
|
E. wew. cząsteczki możemy podzielić na Lernen beginnen
|
|
spinową jąder, translacyjną rotacyjną oscylacyjną i elektronową
|
|
|
Teoria quasi-równowagowa opiera się na 4 założeniach: Lernen beginnen
|
|
Czas dysocjacji jonów jest długi, Dysocjacja jest powolna w stosunku do szybkości redystrybucji energii wzbudzenia, Energia jest rozprowadzana z równym prawdopodobieństwem pomiędzy wszystkie stopnie swobody, Produkty dysocjacji są wynikiem szeregu konkurencyjnych procesów dysocjacji oraz reakcji następczych
|
|
|
Fragmentacja indukowana kolizyjnie (CID) Lernen beginnen
|
|
zderzenie między jonem a celem, jednoczasteczkowy rozkład wzbudzonego jonu
|
|
|
Kolizje możemy podzielić na: Lernen beginnen
|
|
wysokoenergetyczne przy użyciu np. helu to otrzymujemy prostsze widma i bardziej wyraźne fragmentacje oraz niskoenergetyczne np. azot to otrzymujemy widma o bardziej zróżnicowanych ścieżkach fragmentacji
|
|
|
Energia fragmentacji jonu Lernen beginnen
|
|
jeśli otrzymana energia jest wyższa niż energia wiązania obecnego w jonie to zachodzi rozpad tego wiązania i na widmie obserwuje się sygnał pochodzący od odpowiedniego jonu im wyższa energia przekazana cząstce tym więcej fragmentacji stosunek intensywności sygnałów pochodzących od jonów fragmentacyjnych zależy od rozkładu energii w jonie macierzystym bezpośrednio przed zderzeniami
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
ten jon który fragmentujemy
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
jeśli damy go do fragmentacji to może być on jonem macierzystym
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
jon który powstał po fragmentacji
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
niewidzoczny na widmie mas
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
jon którego nie wiemy z czego powstał
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
product ion, precursor ion, neutral loss, MRM
|
|
|
Przemiatanie jonów potomnych (SIM, CID, SCAN) Lernen beginnen
|
|
pozwala otrzymać produkty fragmentacji jonu macierzystego. Stosowany w celu identyfikacji związków i tworzenia bibliotek widm
|
|
|
Wraz ze wzrostem energii kolizji Lernen beginnen
|
|
maleje masa jonów fragmentacyjnych, naastępuje zmiana stosunków intensywności sygnałów i/lub zwiększa się ilość jonów fragmentacyjnych
|
|
|
Przemiatanie jonów macierzystych (SCAN, CID, SIM) Lernen beginnen
|
|
służy do poszukiwania grup związków które w wyniku framentyzacji dają charakterystyczny jon potomny
|
|
|
Monitorowanie utraty fragmentów obojętnych (SCAN, CID, SCAN) Lernen beginnen
|
|
służy do poszukiwania związków które tracą cząsteczke obojętną
|
|
|
Monitorowanie wybranych reakcji fragmentacji (MRM) (SIM, CID, SIM) Lernen beginnen
|
|
duża intensywność sygnału oraz niska wartość sumu. stosowany w analizie ilościowej
|
|
|
DDA (data dependent acquisition) Lernen beginnen
|
|
celem jest zidentyfikowanie jak największej liczby peptydów, pojedyńczo. w 1 skanie uzyskujemy widmo mas próbki i najbardziej intensywne przenosimy do 2 etapu gdzie przy 2 skanie badamy b. wąskie pasmo m/z
|
|
|
DIA (data independent acquisition Lernen beginnen
|
|
celem jest ciągłe monitorowanie intesywności jonów fragmentacyjnych dla wszystkich eluujących peptydów. Różni się od DDA tym że wszystkie jony są transportowane do 2 etapu ale w danym wąskim zakresie m/z
|
|
|
Widma MS związków możemy dzielić z punktu widzenia Lernen beginnen
|
|
techniki jonizacyjnej, rozdzielczości, metody pomiaru
|
|
|
|
Lernen beginnen
|
|
jeśli związek ma parzystą mase to ma 0 lub parzystą l.at. azotu
|
|
|
